一、赛项名称
赛项名称：鸡新城疫HI抗体水平测定
赛项类别：常规赛项þ行业特色赛项□
赛项组别：中职组□高职组þ
赛项归属专业大类：农林牧渔大类
二、赛项目的
本赛项考核的核心技能是鸡的采血方法、1%鸡红细胞悬液配制、红血球凝集（HA）试验操作与结果判定、四个血凝单位（HAU）病毒溶液配制、红血球凝集抑制（HI）试验操作与结果判定、HI抗体滴度报告撰写等技能。本赛项考核的核心知识是《动物微生物学》、《兽医免疫学》、《兽医临床诊疗技术》、《动物传染病学》等专业课程理论知识。
本赛项由学校、行业、企业共设，是高职畜牧兽医专业的核心技能，通过技能竞赛有效促进学校建设并完善实验、实训平台，加强核心技能的训练，提升高职畜牧兽医专业的人才培养质量。同时，通过竞赛方式也有效促进学校与企业之间的合作交流，推动高职畜牧兽医等专业教学改革和校企合作，共同培养畜牧兽医行业一线技能型人才。
三、竞赛内容
该项目由两人配合完成，按照操作规程进行试验器材的准备，并进行标识，合理摆放；之后进行采血、离心、洗涤，配制1%鸡红细胞悬液；用微量移液器在96孔V形微量反应板上进行红血球凝集试验，测定新城疫标准抗原的血凝价；根据血凝试验测定的新城疫标准抗原的血凝效价，配制4个血凝单位病毒溶液；进行被检血清的血凝抑制试验操作，并设新城疫标准阳性血清对照、阴性血清对照；正确读取HI抗体滴度结果，并完成试验相关记录和测定结果报告。
四、竞赛方式
本赛项为团体赛。每组参赛学生2名，比赛由2名学生配合完成，参赛选手均为高职院校在籍学生。每组选手限2名指导教师，指导教师须为本校专兼职教师。
五、竞赛时间安排与流程
本项目竞赛日程与流程安排见表1。
表1 项目竞赛日程安排表
| 时间 |
主要工作 |
|
| 第1天 |
16:00 |
熟悉赛场 |
| 第2天 |
8:00 |
比赛检录，工位抽签 |
| 8:15 |
选手进入技能比赛场，按工位号就位 |
|
| 8:20 |
技能裁判组成员进入技能比赛场 |
|
| 8:30～11:30 |
选手操作，裁判评分 |
|
| 11:30～12:00 |
裁判组评分汇总 |
|
| 12:00～12:30 |
成绩汇总 |
|
六、竞赛试题
本赛项不设理论考试，只对技能操作进行综合考核，技能竞赛题为公开试题，见本赛项规程的竞赛内容。
七、评分标准制定原则、评分方法、评分细则
成绩评定按照公平、公正、客观的原则进行。项目组设裁判员5名，监督员5名，仲裁员3名，由大赛执委会聘请相关专业职业技能鉴定高级考评员、行业企业技术专家、高等院校及科研院所高级职称教师或研究员为裁判员，裁判组根据赛项特点，采取过程评分的方式评分，结果评定采用百分制。竞赛现场每位裁判对每一组选手分别打分，由项目组裁判统一评分，去掉一个最高分，去掉一个最低分，其余得分的算术平均值作为参赛队伍的最后得分。项目技能竞赛评分标准见表2（全国职业院校技能大赛官方网站，http://www.chinaskills-jsw.org/）。
表2 项目技能竞赛评分标准
| 序号 |
考核内容 |
考核要点 |
分值 |
评分标准 |
| 一 |
试验器材准备 （8分） |
仪器使用与材料准备 |
2 |
1.仪器正确使用，1分； 2.材料准备到位，1分。 参考评分要点： 未检查清点仪器材料，仪器使用不正确，材料准备不到位，口罩、乳胶手套穿戴不规范，酌情扣分。 |
| 物品标识 |
4 |
3.标识合理，2分； 4.制作标签，标识清晰（注明参赛队序号、血凝板编号及日期），2分。 参考评分要点： (1)使用的烧杯、离心管（包括管盖）和血凝反应板均要标记，不标识不得分； (2)标识遗漏或标识不清，酌情扣分。 |
||
| 实桌面整洁度 |
2 |
5.摆放合理，2分； 参考评分要点： 试验器材无序摆放，不得分。 |
||
| 二 |
配制1%鸡红细胞悬液 （18分） |
采血方法和采血量 |
6 |
6.抗凝剂适量，2分； 7.采血方法规范、熟练， 2分； 8.采血量控制在2-4mL之间，2分。 参考评分要点： (1)血液与抗凝剂比例4:1； (2)采血时，鸡放置于鸡笼上保定采血； (3)采血局部合理消毒； (4)采血时一针见血； (5)采血量控制在2-4mL之间 (6)用干棉球按压止血； (7)采血后采血局部未见明显血肿； (8)采血未成功的，该项不得分。 * 以上细节未规范操作，酌情扣分，累加6分扣完为止。 |
| 离心机使用 |
4 |
9.离心机使用规范，4分。 参考评分要点： (1)离心前做好平衡，对称放入转头孔内； (2)规范使用天平， (3)离心机自动停止，机门打开； * 以上细节未规范操作，酌情扣分，累加扣完4分为止。 |
||
| 红细胞悬液配制方法 |
8 |
10.稀释液倍数正确，2分； 11.离心机转数、离心时间正确，2分； 12.血球洗涤次数适宜，2分； 13.压积红细胞吸取正确，2分。 参考评分要点： (1)红细胞洗涤时，灭菌生理盐水为抗凝血的2-3倍稀释，稀释后每离心管最液体体积大不可超过12mL； (2)红细胞洗涤时灭菌生理盐水与红细胞用大量程移液器充分混匀； (3)离心参数设定：2000 r/m，5-10 min； (4)红细胞洗涤时吸除白细胞及血小板等杂质； (5)红细胞洗涤3~5次； (6)最后配置1%红细胞为10-20 mL； * 以上细节未规范操作，酌情扣分，累加扣完8分为止。 |
||
| 三 |
血凝试验 （20分） |
器材使用 |
4 |
14.微量移液器使用规范，2分； 15.吸头更换操作符合规范，2分。 参考评分要点： (1)加吸头时操作规范，不可用力撞击枪盒； (2)微量移液器设置准确； (3)微量移液器吸取和打出液体操作规范，移液器垂直加样为规范，倾斜角度不要过大； * 以上细节未规范操作，酌情扣分，累加扣完4分为止。 |
| 操作程序 |
6 |
16.吸取试剂更换吸头，2分； 17.加样顺序正确，1分； 18.倍比稀释操作规范，2分； 19.震荡及感作时间得当，1分。 参考评分要点： (1)稀释液加样完成后，在吸取待检品前需更换吸头； (2)加1%红细胞时，按由病毒低浓度往高浓度的方向加样； (3)倍比稀释时不产生大量气泡； (4)倍比稀释时混匀充分，移液正确； (5)加样时，吸头与液面不接触； (6)试剂滴加孔内； (7)可以使用振荡器，以液体不震出来为准； (8)固液废弃物分。 * 以上细节未规范操作，酌情扣分，累加扣完6分为止。 |
||
| 结果判定准确 |
10 |
20.能依据生理盐水对照孔的RBC呈明显钮扣状沉到孔底时判定结果，4分； 21.对照孔结果正确时，能确定完全凝集的新城疫标准抗原最高稀释倍数为病毒的血凝价，4分； 22.能把完全凝集的病毒的最高稀释倍数作为1个血凝单位，2分。 参考评分要点： (1)判断血凝价，做好记录；未做记录扣分2分； (2)读数时，结果有跳孔现象的，每跳1孔扣2分。 |
||
| 四 |
配制4个血凝单位 病毒溶液 （10分） |
器材选择 |
4 |
23.器材选择合理，2分； 24.使用规范、熟练，2分。 参考评分要点： (1)加吸头时操作规范，不可用力撞击枪盒； (2)选择合适量程微量移液器移取样品； (3)微量移液器吸取和打出液体操作规范； * 以上细节未规范操作，酌情扣分，累加扣完4分为止。 |
| 配制方法 |
4 |
25.稀释倍数计算正确，2分； 26.稀释液加入得当、操作规范，2分。 参考评分要点： (1)根据血凝价，正确计算稀释倍数；计算错误扣2分 (2)微量移液器设置准确；未规范操作酌情扣分。 |
||
| 配制量适宜 |
2 |
27.配制量适宜，2分； 注评分要点： 配置量10-20 mL为适量，每超过10 mL扣1分，最多扣2分。 |
||
| 五 |
血凝抑制试验 （20分） |
器材使用 |
4 |
28.器材使用规范、熟练，4分； 参考评分要点： (1)加吸头时操作规范，不可用力撞击枪盒； (2)微量移液器设置准确； (3)微量移液器吸取和打出液体操作规范，移液器垂直加样为规范，倾斜角度不要过大； * 以上细节未规范操，作酌情扣分，累加扣完4分为止。 |
| 操作程序 |
6 |
29.96孔V型微量反应板各孔加入的稀释剂正确，1分； 30.被检血清、新城疫标准阴性血清对照、标准阳性血清对照加入正确，2分； 31.感作时间适宜，2分； 32.吸头更换正确，1分。 参考评分要点： (1)参照国标，对照设立完整，每缺一个对照扣1分； (2)稀释液加样完成后，在吸取待检品前需更换吸头； (3)倍比稀释时不产生大量气泡； (4)加样时，吸头与液面不接触； (5)试剂不滴加到孔外； (6)加1%红细胞时边滴加边震荡混匀； (7)感作时间正确； (8)固液废弃物分开。 * 以上细节未规范操作，酌情扣分，累加扣完6分为止。 |
||
| 结果判定准确 |
10 |
33.能在生理盐水对照孔红细胞呈明显钮扣状沉淀到孔底时判定结果，2分； 34.在对照孔结果正确情况下，能从背侧观察RBC有无呈泪珠样流淌，2分； 35.能把完全不凝集（RBC完全流下）被检血清的最高稀释倍数作为该血清的HI滴度，3分； 36.阴性血清与标准对照的HI滴度不大于2log2，阳性血清与标准抗原对照的HI滴度与已知滴度相差1个稀释度范围内，3分。 参考评分要点： (1)读数时，有跳孔现象的，每跳1孔扣2分。 (2)判断血清HI滴度，做好记录；未做记录扣分2分； |
||
| 六 |
抗体滴度报告 （24分） |
抗体滴度报告 |
2 |
37.抗体滴度报告方式正确，1分； 38.试验记录清晰，1分 参考评分要点： (1)抗体滴度用以2为底的负对数（-log2）表示； (2)试验记录和报告书写整洁，不乱涂改。 * 以上细节未规范书写，酌情扣分，累加扣完2分为止。 |
| 结果误差 |
20 |
39.每个样本1分，共20个样本 参考评分要点： (1)结果误差±1，得1分； (2)误差超过±1，0分。 |
||
| 场地整洁度 |
2 |
40.场地整洁，2分 参考评分要点： (1)移液枪调到最大量程； (2)其他仪器和器皿未复位； (3)注射器未放入废物缸等，每错1项扣1分，扣完为止。 * 以上细节未规范操作，酌情扣分，累加扣完2分为止。 |
||
| 总分 |
100 |
| ||
八、奖项设置
本赛项设一、二、三等奖和优秀奖，获奖比例分别为参赛队数的10％、20％、30%、20%，末位20%不设奖。每位获奖选手和指导教师均可获得相应证书。
九、技术规范
本赛项以教育部颁布的职业学校相关专业教学指导方案和国家职业标准《动物疫病防治员》（三级）规定的知识和技能要求为基础，依据《新城疫诊断技术》（GB/T 16550-2008）标准及技能型人才培养要求，确定比赛内容及方式。
十、竞赛规则
1.参赛选手必须持本人身份证和参赛证竞赛。
2.参赛选手提前15分钟检录进入赛场，按照抽签座位号参加比赛，不得擅自变更、调整。迟到15分钟以上者取消参赛资格；开赛15分钟后，选手方可离开赛场。
3.选手进入赛场后须检查实验用品是否齐全，如有疑问向裁判或工作人员询问。
4.选手在竞赛过程中不得擅自离开赛场，如有特殊情况，需经裁判同意；选手若需休息、饮水或去洗手间等，所耗用时间计算在比赛时间内。
5.选手实物标签上不得有任何暗示选手身份的记号或符号，否则取消竞赛成绩。
6.各组参赛选手要做好详细试验记录，判定试验结果时要举手示意裁判。
7.比赛过程中如果动物出现死亡等意外情况，举手示意，可更换实验动物。
8.竞赛时间结束时，选手应立即停止操作，不得以任何理由拖延竞赛时间。结束后举手示意，由志愿者记录结束时间，选手签座位号确认后离开比赛现场。
十一、赛场环境
竞赛场地为承办单位独立的实验室（东实验楼一楼兽医医药实训室），面积约为80m2，赛场内设有分区实验台，每张实验台标有工位号，每组选手根据抽签工位号对应实验台。赛场照明、控温良好，能提供稳定的水、电，符合竞赛标准环境要求。
十二、技术平台
本竞赛项目需要的仪器设备符合各高职农业类院校畜牧兽医专业建设要求。仪器设备按《新城疫诊断技术》（GB/T16550-2008）标准要求配制，且竞赛所用仪器、设备与材料等均为畜牧兽医专业常用仪器、设备与材料。本赛项所用的仪器、设备与材料见表3（全国职业院校技能大赛官方网站，http://www.chinaskills-jsw.org/）。
表3 项目竞赛用仪器、设备与材料
| 序号 |
器材或设备名称 |
数量 |
规格 |
| 1 |
普通托盘天平 |
1台 |
500g |
| 2 |
普通离心机 |
1台 |
盐城凯特TD4 |
| 3 |
微型振荡器（MH-2） |
1台 |
|
| 4 |
DRAGON微量移液器 |
1支 |
0.005～0.05 mL |
| 5 |
DRAGON微量移液器 |
1支 |
0.1～1 mL |
| 6 |
上海佳安/DRAGON微量移液器 |
1支 |
2～10 mL |
| 7 |
微量移液器吸头 |
150个 |
0.005～0.05 mL |
| 20个 |
0.1～1 mL |
||
| 10个 |
2～10 mL |
||
| 8 |
微量移液器吸头盒 |
2个 |
0.005～0.05 mL |
| 1个 |
0.1～1 mL |
||
| 9 |
板式微量移液器架 |
1个 |
|
| 10 |
96孔V型血凝反应板 |
5块 |
|
| 11 |
烧杯 |
5个 |
50 mL |
| 2个 |
500 mL |
||
| 12 |
禽用采血器 |
2支 |
5 mL |
| 2支 |
10mL |
||
| 13 |
具盖塑料离心管 |
6支 |
10 mL |
| 14 |
指型离心管 |
6支 |
1.5 mL |
| 15 |
试管架 |
1个 |
|
| 16 |
指型离心管架 |
1个 |
|
| 17 |
细记号笔 |
1支 |
|
| 18 |
实验白大褂 |
2件 |
|
| 19 |
生理盐水 |
500 mL |
|
| 20 |
柠檬酸钠溶液 |
20mL |
3.8% |
| 21 |
鸡新城疫标准抗原 |
1份 |
|
| 22 |
被检血清样本 |
20个 |
|
| 23 |
鸡新城疫标准阳性血清 |
1份 |
|
| 24 |
鸡新城疫标准阴性血清 |
1份 |
|
| 25 |
酒精棉球 |
若干 |
75% |
| 26 |
干棉球 |
若干 |
|
| 27 |
非免疫公鸡 |
1只 |
|
| 28 |
橡胶手套 |
4副 |
|
| 29 |
医用防护口罩 |
2只 |
|
| 30 |
实验报告单 |
1张 |
|
| 31 |
标签纸 |
若干 |
|
| 33 |
A4纸 |
2张 |
|
| 34 |
签字笔 |
2支 |
|
十三、安全保障
1.比赛用生物制品均由符合国家标准的企业生产与提供，实验动物（鸡）符合生物安全规范。
2.赛场的工作人员、裁判员、参赛选手一律凭大赛执委会统一配发的证件出入。
3.进入赛场的人员一律不得携带包、食品、饮料、手机等物品。
4.赛场严禁吸烟。
5.工作人员、裁判员、参赛人员等进入赛场后要严格阅读赛场的应急安全疏散图，当发生紧急情况，听到疏散指令时，要迅速按疏散图撤离赛场。
十四、申诉与促裁
本赛项在竞赛过程中若出现有失公正或有关人员违规等现象，代表领队可在竞赛结束后2小时之内向仲裁组提出申诉。大赛采取两级仲裁机制。赛项设仲裁工作组，承办单位设仲裁委员会。赛项仲裁工作组在接到申诉后的2小时内组织复议，并及时反馈复议结果。申诉方对复议结果仍有异议，可由领队向承办单位仲裁委员会提出申诉。承办单位仲裁委员会的仲裁结果为最终结果。
十五、竞赛须知
（一）参赛队须知
1.发扬良好的道德风尚，听从指挥，服从裁判，不弄虚作假。
2.坚决执行竞赛的各项规定，对竞赛期间的意见和建议及时向执委会提出。
3.各参赛队应可在竞赛开始前一天规定时间段进入赛场熟悉环境。
（二）指导教师须知
1.每组选手限2名指导教师。
2.指导教师经报名并通过资格审查后确定，选手和指导教师的对应关系一经确定不得随意变更。
3.比赛期间，指导教师不得进入竞赛场地内，发现违规取消该队参赛资格。
（三）参赛选手须知
1.参赛选手严格遵守赛场规章、操作规程，保证人身及设备安全，接受裁判员的监督和警示，文明竞赛。
2.选手参赛时不得离开竞赛场地，如有特殊情况，需经裁判人员同意后方可离开，但离开期间的时间一律计算在竞赛时间内。
3.每批次参赛选手必须在正式竞赛前30分钟到候赛场报到，报到时应持本人身份证或学生证，并携带大赛组委会签发的参赛证。
4.竞赛时，在收到开赛信号前不得启动操作，只有等竞赛正式开始后，方可进行操作。各参赛选手需在抽签确定的座位上完成相应竞赛项目，严禁作弊行为。
5.比赛期间，参赛选手必须严格遵守赛场纪律，不得在赛场内大声喧哗，不得作弊或弄虚作假；同时，必须严格遵守操作规程，确保设备和人身安全，并接受裁判员的监督和警示。若因选手因素造成设备故障或损坏，无法进行竞赛，裁判长有权终止该队比赛；若因非选手个人因素造成设备故障的，由裁判长视具体情况做出裁决。
6.在竞赛规定时间结束时各参赛队应立即停止操作，不得以任何理由拖延竞赛时间。参赛队欲提前结束竞赛，应向现场裁判员举手示意并记录竞赛终止时间。竞赛终止后，不得再进行任何与竞赛有关的操作。
7.竞赛操作结束时，各参赛队要按照大赛要求提交竞赛材料，按照现场考试要求的名字进行命名，如不符合命名规则，体现单位信息与编号信息的，取消该队竞赛成绩。